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Tasa de crecimiento tasa media de crecimiento específico : aumento logarítmico de la biomasa durante el período de exposición. Sin embargo, es necesario también que todas las concentraciones de ensayo superiores a la LOEC Amor en linea en otras poblaciones de Uri un efecto nocivo Amor en linea en otras poblaciones de Uri o igual al que se observa con dicha concentración. Sustancia problema : sustancia o mezcla estudiada con este método de ensayo.

Rendimiento : valor de una variable de medición al final del período de exposición menos el valor de la variable de medición al inicio del período de exposición; indica el aumento de biomasa durante el ensayo.

Cepas conocidas por ser adecuadas para el ensayo. Algas verdes. Desmodesmus subspicatus antes conocida como Scenedesmus subspicatus Navicula pelliculosaUTEX Orígenes de las cepas. Las cepas recomendadas pueden conseguirse en forma de cultivos procedentes de una solalula de alga en las siguientes colecciones por orden alfabético :.

Aspecto y características de las especies recomendadas. Recomendaciones específicas de cultivo y manipulación de las especies de ensayo recomendadas. Pseudokirchneriella subcapitata y Desmodesmus subspicatus. Las colecciones de cultivos proveen de información sobre los medios adecuados.

Anabaena flos-aquae. Pueden utilizarse diversos medios de cultivo para mantener un cultivo madre. Es especialmente importante evitar que el cultivo discontinuo pase de la fase logarítmica de crecimiento al renovarse, ya que la recuperación es difícil después. Anabaena flos-aquae forma agregados de cadenas encajadas de células. Puede ser necesario romper estos agregados si, para determinar la biomasa, se hace un recuento con microscopio o se utiliza un contador electrónico de partículas.

Es posible someter submuestras a un baño de ultrasonidos para romper las cadenas, a fin de reducir la variabilidad del recuento. La intensidad y la duración del baño de ultrasonidos deben ser las mismas con todos los recipientes de tratamiento.

Así mejora la fiabilidad de las determinaciones de densidad efectuadas con el microscopio. Para la determinación del volumen celular total de Anabaena puede utilizarse un contador electrónico de partículas tras romper las cadenas de células mediante un baño de ultrasonidos aplicado cuidadosamente. Es necesario ajustar la energía de los ultrasonidos para evitar destruir las células.

Utilícese un agitador vórtex o un método similar adecuado a fin de que la suspensión de algas utilizada para inocular los recipientes de ensayo esté bien mezclada y sea homogénea. Los recipientes de ensayo deben colocarse en un agitador orbital o recíproco, a unas revoluciones por minuto.

Otra posibilidad es utilizar una agitación intermitente para reducir la tendencia de Anabaena a agregarse. Si se produce la agregación, hay que tener cuidado para tomar muestras representativas con el fin de medir la biomasa. Para romper los agregados de algas puede ser necesario agitar vigorosamente antes de tomar la muestra.

Synechococcus leopoliensis. Synechococcus leopoliensis crece en forma de células aisladas de forma cilíndrica. Las células son muy pequeñas, lo que hace difícil utilizar el recuento con microscopio para medir la biomasa. También puede aplicarse la técnica de medición fluorométrica in vitro. Navicula pelliculosa. Obsérvese el requisito de que el medio tenga silicato. Navicula pelliculosa puede formar agregados en ciertas condiciones de crecimiento.

Debido a la producción de lípidos, las células de las algas tienden a veces a acumularse en la película superficial. En tales circunstancias, hay que adoptar medidas especiales cuando se toman submuestras para la determinación de la biomasa a fin de que las muestras sean representativas.

Puede ser necesario agitar enérgicamente, por ejemplo utilizando un mezclador vórtex. Medios de cultivo. Para preparar estos medios deben utilizarse sustancias de grado analítico o reactivo y agua desionizada.

La proporción molar del EDTA respecto al hierro sobrepasa ligeramente la unidad. Así se evita la precipitación del hierro y, a la vez, se reduce al mínimo la quelación de iones de metales pesados. El pH del medio se mide cuando se ha alcanzado el equilibrio entre el carbonato del medio y la presión parcial de CO 2 del aire atmosférico. Composición en elementos de los medios de ensayo. Preparación del medio de la OCDE. Las soluciones madre 2 y 4 no deben esterilizarse en autoclave, sino mediante filtración por membrana.

El medio de cultivo se prepara añadiendo a agua un volumen adecuado de las soluciones madre 1 a Hay que dejar un tiempo suficiente para que el medio llegue al equilibrio con el CO 2 de la atmósfera, en caso necesario burbujeando durante varias horas aire esterilizado por filtración.

Se añade 1 ml de cada solución madre de 2. Se preparan soluciones madre de macronutrientes disolviendo las siguientes sustancias en ml de agua destilada o desionizada. Los reactivos 2. Nota 1: Utilícese solo para el ensayo con especies de diatomeas. La solución madre de micronutrientes se prepara disolviendo las siguientes sustancias en ml de agua destilada o desionizada:. Nota 2: Utilícese solo en el medio para los cultivos madre de especies de diatomeas.

Ejemplo de procedimiento para el cultivo de algas. Observaciones generales. El objetivo del cultivo mediante el siguiente procedimiento es el de obtener cultivos de algas para ensayos de toxicidad. Puede ser conveniente utilizar cultivos axénicos, pero se deben obtener y utilizar cultivos procedentes de una solalula de alga. Todas las operaciones deben llevarse a cabo en condiciones estériles, con el fin de evitar la contaminación con bacterias u otras algas.

Equipo y material. Procedimiento para la obtención de algas. Preparación de soluciones nutritivas medios. Todas las sales nutrientes del medio se preparan como soluciones madre concentradas y se mantienen en lugar fresco y oscuro. Estas soluciones se esterilizan por filtración o en autoclave. El medio se prepara añadiendo a agua destilada estéril la cantidad correcta de solución madre, teniendo cuidado de que no se produzca ninguna contaminación. Cultivos madre.

Los cultivos madre son pequeños cultivos de algas que se trasfieren periódicamente a un medio fresco para hacer de material inicial del ensayo. Si los cultivos no se utilizan regularmente, se extienden en tubos de agar inclinado. Estos cultivos se transfieren a medio fresco al menos cada dos meses.

La tasa de crecimiento de una especie puede determinarse a partir de la curva de crecimiento. El objetivo del precultivo es obtener una cantidad apropiada de algas para la inoculación de los cultivos de ensayo. Consideraciones generales. La respuesta en los ensayos con algas y otros ensayos de crecimiento microbiano incremento de biomasa es por su naturaleza una variable continua o métrica: la tasa de un proceso si se utiliza la tasa de crecimiento, o su integral a lo largo del tiempo si se elige la biomasa.

El sistema es distribuido u homogéneo y la biomasa puede considerarse como un continuo sin tener en cuenta las células en sí. La distribución de la varianza del tipo de respuesta de un sistema de estas características depende solo de los factores experimentales lo que se describe típicamente con una distribución de errores normal o logarítmico-normal.

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Obsérvese que todas las respuestas tienen un error asociado, y que es posible calcular inhibiciones negativas aparentes solo como resultado de errores aleatorios. El procedimiento puede describirse de la manera siguiente. Se representan la curva ajustada y los datos medidos, y se examina si es adecuado el ajuste de la curva. Si la relación funcional elegida para ajustar la relación concentración-respuesta no describe bien toda la curva o alguna parte fundamental de ella, como la respuesta a concentraciones bajas, debe elegirse otra opción de ajuste de la curva como, por ejemplo, una curva asimétrica del tipo de la función de Weibull, en lugar de una simétrica.

Las inhibiciones negativas pueden ser un problema, por ejemplo con la función de distribución logarítmico-normal, y también en este caso ha de aplicarse otra función de regresión.

No se recomienda asignar un valor cero ni uno positivo pequeño a tales valores negativos porque así se distorsiona la distribución del error.

Puede ser adecuado hacer ajustes distintos en partes de la curva tales como la de inhibición baja para calcular EC x con bajos valores de x. La precisión de una estimación de EC 20 suele ser bastante mejor que la de una EC 10porque la EC 20 suele corresponder a la parte aproximadamente lineal del centro de la curva concentración-respuesta.

A veces es difícil interpretar la EC 10 debido a una estimulación del crecimiento. Así pues, aunque la EC 10 se puede obtener normalmente con suficiente exactitud, se recomienda asimismo indicar siempre la EC Factores de ponderación.

Respuestas de normalización. La normalización por la respuesta promedio de control plantea varios problemas de principio y ocasiona una estructura de varianza bastante compleja. Salvo que este error sea despreciable, es necesario corregir los factores de ponderación de la regresión y los límites de confianza para tener en cuenta la covarianza con el control Draper y Smith, Obsérvese que es importante una elevada precisión del promedio estimado de Amor en linea en otras poblaciones de Uri respuesta del control a fin de minimizar la varianza general de la respuesta relativa.

La varianza se indica a continuación:. Intervalos de confianza inversos. Kooijman, S. Water Research30 Andersen, J. Continuous ecotoxicological data evaluated relative to a control response. Journal of Agricultural, Biological and Environmental Statistics3 El presente método de ensayo describe un método para determinar los efectos de una sustancia sobre los microorganismos del lodo activado en gran medida, bacterias midiendo su tasa de respiración oxidación de carbono o de amonio en unas condiciones determinadas y en presencia de concentraciones diferentes de la sustancia problema.

En general, parece que el ensayo de inhibición de la respiración se ha aplicado con éxito desde su primera publicación, pero en algunas ocasiones se han notificado resultados engañosos, como, por ejemplo, en las referencias 24 o 5. Las investigaciones han puesto de manifiesto que estos resultados se obtienen cuando el lodo activado utilizado en el ensayo es fuertemente nitrificante y la sustancia problema tiene un impacto mayor en la oxidación del amonio que en la oxidación heterotrófica en general.

Por lo tanto, estos resultados engañosos pueden superarse mediante la realización de ensayos adicionales con un inhibidor específico de la nitrificación. Por medición de las tasas de absorción de oxígeno en presencia y en ausencia de un inhibidor de este tipo como, por ejemplo, la N-aliltiourea ATUes posible calcular las distintas tasas de absorción de oxígeno total, heterotrófica y de nitrificación 4 7 8.

Las tasas de respiración de las muestras de lodo activado alimentado con agua residual sintética se miden en una celda cerrada que contiene un electrodo de oxígeno después de un tiempo de contacto de 3 horas. La sensibilidad de cada lote de lodo activado debe comprobarse el día de la exposición con una sustancia de referencia apropiada.

El ensayo se utiliza típicamente para determinar la EC x p. En este caso, el porcentaje de inhibición de la tasa de absorción de oxígeno se calcula mediante comparación de la tasa de absorción de oxígeno en presencia de la sustancia problema con la tasa media de absorción de oxígeno de los correspondientes controles sin sustancia problema, en ambas ocasiones tanto en presencia como en ausencia del inhibidor específico, la N-aliltiourea.

La Amor en linea en otras poblaciones de Uri absorción de oxígeno debida a procesos abióticos puede detectarse mediante la determinación de la tasa en mezclas de sustancia problema, medio de agua residual sintética y agua, prescindiendo del lodo activado.

Deben presentarse datos analíticos adicionales de apoyo para afinar la concentración EC x cuando exista incertidumbre acerca de la estabilidad de la sustancia problema o de su volatilidad. Deben someterse al ensayo periódicamente sustancias de referencia, con el fin de garantizar que son fiables el método de ensayo y las condiciones de ensayo, y para comprobar la sensibilidad de cada lote de lodo activado utilizado como inóculo microbiano el día de la exposición.

Asimismo, puede utilizarse el sulfato de cobre II pentahidratado como sustancia de referencia para la inhibición de la respiración total 9. La N-metilanilina puede utilizarse como inhibidor específico de referencia de la nitrificación 4.

Si la tasa es inferior, debe repetirse el ensayo con lodo activado lavado o con lodo de otra fuente. Recipientes y equipo del ensayo. Agua residual sintética. El medio debe prepararse de forma que contenga los siguientes componentes en las cantidades indicadas:.

Otra posibilidad es esterilizar los distintos componentes por separado, antes de su almacenamiento, o añadir la peptona y el extracto de carne poco antes de efectuar el ensayo. Sustancia problema. Las sustancias poco hidrosolubles, las mezclas con componentes de diferentes hidrosolubilidades y las sustancias adsorbentes deben pesarse directamente en los recipientes de ensayo.

En estos casos, el uso de soluciones madre puede ser una alternativa si se determinan analíticamente en los recipientes de ensayo las concentraciones disueltas de las sustancias problema antes de la adición de lodo activado.

Si se preparan fracciones acomodadas en agua WAFes también esencial una determinación analítica de la concentración disuelta de las sustancias Amor en linea en otras poblaciones de Uri en los recipientes de ensayo.

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Es posible aplicar ultrasonidos a las soluciones madre y someter las suspensiones a una agitación previa, por ejemplo durante la noche, cuando se disponga de información adecuada sobre la estabilidad de la sustancia problema en tales condiciones.

La sustancia problema puede afectar negativamente al pH del sistema de ensayo. El pH de las mezclas tratadas con la sustancia problema debe determinarse antes de la prueba, en un ensayo preliminar, para determinar si es necesario un ajuste del pH antes de la prueba principal, y de nuevo el día de la prueba principal. Las soluciones o suspensiones de la sustancia problema en el agua deben neutralizarse antes de la adición del inóculo, si fuera necesario. No obstante, dado que la neutralización puede modificar las propiedades químicas de la sustancia, pueden efectuarse otros ensayos, en función de los objetivos del estudio, para evaluar el efecto de la sustancia problema sobre el lodo sin ajuste del pH.

Sustancia de referencia. Para acelerar la disolución se debe utilizar agua caliente o aplicar ultrasonidos; se lleva al volumen final una vez se haya enfriado a temperatura ambiente. Sin embargo, debe garantizarse que la sustancia de referencia no se modifica estructuralmente.

Inhibidor específico de la nitrificación. Control abiótico. En algunas circunstancias poco frecuentes, una sustancia problema con fuertes propiedades reductoras puede provocar un consumo abiótico mensurable de oxígeno. En tales casos, es necesario contar con controles abióticos para discriminar entre absorción abiótica de oxígeno por la sustancia problema y respiración microbiana. Los controles abióticos pueden prepararse omitiendo el inóculo de las mezclas de ensayo.

Del mismo modo, pueden incluirse controles abióticos sin inóculo cuando se llevan a cabo mediciones analíticas de apoyo para determinar la concentración obtenida durante la fase de exposición del ensayo, por ejemplo en caso de utilización de soluciones madre de sustancias poco hidrosolubles con componentes con diferente hidrosolubilidad. En casos concretos, puede ser necesario preparar un control abiótico con inóculo esterilizado por ejemplo, mediante tratamiento en autoclave o añadiendo sustancias tóxicas esterilizadoras.

A este respecto debe prestarse especial atención a los peróxidos. Un inóculo esterilizado ofrece una gran superficie. Para el uso general, debe recogerse lodo activado a la salida del tanque de aireación, o cerca de la salida del tanque, de una planta de tratamiento de aguas residuales con funcionamiento adecuado alimentada predominantemente con aguas residuales domésticas.

Sin embargo, es probable que los lodos procedentes de distintas plantas de tratamiento presenten distintas características y sensibilidades. A menudo es necesario lavar el lodo como, por ejemplo, cuando es baja la tasa Amor en linea en otras poblaciones de Uri respiración endógena. El proceso de lavado y centrifugado debe repetirse en caso necesario.

El lodo activado debe airearse continuamente p. Pueden surgir dificultades si se forma espuma durante la incubación hasta el punto de que la espuma y los sólidos del lodo en ella transportados salen de los recipientes de aireación. En ocasiones, la formación de espuma puede resultar simplemente de la presencia de agua residual sintética, pero debe contarse con esta formación de espuma si la sustancia problema es, o contiene, un tensioactivo.

Si se emplean agentes antiespumantes, no debería producirse ninguna interacción con el inóculo ni con la sustancia problema. Puede determinarse la inhibición de tres absorciones de oxígeno diferentes: la total, la solo heterotrófica y la debida a la nitrificación.

Normalmente debe ser adecuada la medición de la inhibición de la absorción total de oxígeno. Mezclas de ensayo. Mezclas de referencia. Deben prepararse mezclas F R con la sustancia de referencia, por ejemplo, 3,5-diclorofenol, en lugar de la sustancia problema, de la misma manera que las mezclas de ensayo.

Creencia en la Tierra hueca

Controles en blanco. Deben prepararse controles en blanco F B al comienzo y al final del período de exposición en ensayos en los que se establecen los vasos del ensayo secuencialmente a intervalos. Deben diluirse con agua hasta el mismo volumen que las mezclas de ensayo y de referencia. En caso necesario, por ejemplo si se sabe o sospecha que la sustancia problema presenta propiedades reductoras fuertes, debe prepararse una mezcla F A para medir el consumo abiótico de oxígeno.

La mezcla debe tener las mismas cantidades de sustancia problema y de agua residual sintética, y el mismo volumen que las mezclas de ensayo, pero sin lodo activado. Procedimiento general y mediciones. También es necesario agitar los cultivos para mantener en suspensión los flóculos de lodo. Al final de la incubación, después de los períodos de exposición especificados, que suelen ser de 3 horas, se toman muestras para medir la tasa de disminución de la concentración de oxígeno disuelto en la celda diseñada a tal fin figura 2 del apéndice Amor en linea en otras poblaciones de Uri o en un frasco de DBO completamente lleno.

La manera de empezar la incubación también depende de la capacidad del equipo empleado para medir las tasas de consumo del oxígeno. En este caso, deben prepararse las diversas mezclas necesarias para el ensayo con agua residual sintética pero sin el inóculo, y a cada recipiente de la serie se le añaden las cantidades necesarias de lodo. Las incubaciones deben iniciarse por turnos, a intervalos establecidos de forma conveniente, por ejemplo de 10 a 15 minutos.

El consumo de oxígeno debe medirse tras 3 horas de exposición. Potencial de nitrificación del lodo. A continuación, deben medirse las tasas de absorción de oxígeno y calcularse la tasa de absorción de oxígeno debida a la nitrificación.

Diseños del ensayo. Ensayo de determinación del intervalo. Se utiliza un ensayo preliminar, cuando sea necesario, para hacer una estimación del intervalo de concentraciones de la sustancia problema necesario en un ensayo definitivo para determinar la inhibición del consumo de oxígeno. Ejemplos de mezclas del ensayo preliminar.

Deben calcularse las tasas de absorción de oxígeno y la tasa de nitrificación, en su caso; después debe calcularse el porcentaje de inhibición. Ha de señalarse que las sustancias poco hidrosolubles, las mezclas con componentes de diferentes hidrosolubilidades y las sustancias adsorbentes deben pesarse directamente en los recipientes de ensayo.

En este caso, el volumen reservado para la solución madre de sustancia problema debe sustituirse con agua de dilución. Ensayo definitivo.

Inhibición de la absorción de oxígeno total. El ensayo debe realizarse con un intervalo de concentraciones deducido del ensayo preliminar. El control abiótico no tiene que repetirse si no hay absorción de oxígeno en el ensayo preliminar, pero si se produce una absorción significativa deben incluirse controles abióticos con cada concentración de sustancia problema. La sensibilidad del lodo debe comprobarse utilizando la sustancia de referencia 3,5-diclorofenol.

En todos los casos, se retiran muestras de los recipientes de ensayo después de 3 horas, y también después de 30 minutos en caso necesario, para medir la tasa de absorción de oxígeno en la celda del electrodo de oxígeno.

Diferenciación entre inhibición de la respiración heterotrófica y de la nitrificación. La utilización del inhibidor específico de la nitrificación, la ATU, permite la evaluación directa de los Amor en linea en otras poblaciones de Uri inhibidores de la sustancia problema sobre la oxidación Amor en linea en otras poblaciones de Uri y, restando la tasa de absorción de oxígeno en presencia de ATU de la tasa de absorción total sin presencia de ATUpueden calcularse los efectos sobre la tasa de nitrificación.

Las tasas de absorción de oxígeno deben medirse tras el período de exposición; estos valores directos representan solo la respiración heterotrófica, y las diferencias entre estos y las tasas de respiración total correspondientes representan la nitrificación.

A partir de estos datos se calculan los diversos grados de inhibición. Tras el período o períodos de exposición, debe transferirse una muestra del primer recipiente de aireación a la celda del electrodo de oxígeno figura 1 del apéndice 2 y debe medirse inmediatamente la concentración de oxígeno disuelto.

Por lo general, es adecuado el sistema de sonda de agitación propia que tienen algunos electrodos de oxígeno. La celda debe lavarse con agua entre medición y medición.

Como alternativa, puede utilizarse la muestra para llenar un frasco de DBO figura 2 del apéndice 3 provisto de un agitador magnético. A continuación debe insertarse en el cuello del frasco una sonda de oxígeno con un adaptador de manguito y debe ponerse en funcionamiento el agitador magnético. Verificación de la concentración de la sustancia problema. En algunos casos puede ser necesario medir la concentración de la sustancia problema en los recipientes de ensayo.

Hay que señalar que, si se utilizan soluciones madre de:. Con el fin de caracterizar la exposición, es necesaria una estimación analítica de las concentraciones de la sustancia problema en los recipientes de ensayo. Por razones de simplificación, la estimación analítica debe efectuarse antes de la adición del inóculo. Debido a que a los recipientes de ensayo solamente se transfieren fracciones disueltas, las concentraciones medidas pueden ser muy bajas. No es necesario diferenciar entre fracciones disueltas, no disueltas o adsorbidas de la sustancia problema, ya que todas estas fracciones aparecen igualmente en condiciones reales en una planta de tratamiento de aguas residuales, y estas fracciones pueden variar en función de la composición de las aguas residuales.

A veces es inevitable y necesario llegar a bandas de concentración por debajo o por encima de estos valores, por ejemplo cuando la respiración se suprime intensamente y, por lo tanto, es muy lenta, o si un lodo activado particular respira con gran rapidez. La relación entre la respiración total R Tla respiración de nitrificación R N y la respiración heterotrófica R H viene dada por la ecuación Las tasas de respiración específicas se calculan de la forma siguiente:. Sería necesario recurrir a una fuente alternativa de lodo activado en caso de que los ensayos hubieran de considerar los efectos sobre microorganismos heterotróficos y nitrificantes.

Se realiza un ensayo definitivo si hay pruebas de que se reducen las tasas de absorción de oxígeno con diferentes concentraciones de sustancia problema. El porcentaje de inhibición del consumo de oxígeno totalI Ta cada concentración de la sustancia problema se determina mediante la ecuación Finalmente, el porcentaje de inhibición de la absorción de oxígeno debida a la nitrificación, I Na cada concentración de la sustancia problema se determina mediante la ecuación Interpretación de los resultados.

Estimación de la NOEC. Sistema de ensayo. Brown, D. The assessment of the possible inhibitory effect of dyestuffs on aerobic waste-water bacteria, Experience with a screening test. Chemosphere 10 3 : King, E. Inhibition of respiration of activated sludge; variability and reproducibility of results. Toxicity Assessment 1 1 : Activated sludge. Respiration inhibition test. Test Guideline No. Ensayo de inhibición del consumo de oxígeno por lodos activados por oxidación del carbono y del amonio.

Organización Internacional de Normalización. Bealing, D. Painter, H A, Jones K The use of the wide-bore dropping-mercury electrode for the determination of the rates of oxygen uptake and oxidation of ammonia by micro-organisms.

Journal of Applied Bacteriology 26 3 : Painter, H. Testing the toxicity of chemicals by the inhibition of respiration of activated sludge. Toxicity Assessment Fiebig, S. The use of copper II sulphate pentahydrate as reference substance in the activated sludge respiration inhibition test — acc.

Fresenius Environmental Bulletin 13 No. Current approaches in the statistical analysis of ecotoxicity data: a guidance to application, Series on testing and assessment No. Figura 1. Ejemplos de dispositivo de medición. Figura 2. Ejemplo de dispositivo de medición, con utilización de frasco de DBO. Figura 3. Ejemplo de curvas de inhibición. Se basa en métodos anteriores 1 2 3 4 5 6pero incluye modificaciones de tales métodos para tener en cuenta los resultados de recientes investigaciones y consultas sobre diversos aspectos fundamentales.

El método de ensayo se ha validado mediante un ensayo interlaboratorios internacional 7. Este método describe el ensayo de toxicidad con Lemna gibba y Lemna minordos especies que han sido estudiadas ampliamente y son objeto de las normas arriba citadas.

La taxonomía de Lemna spp. Aunque puede aparecer variabilidad genética en la respuesta de Lemna a los agentes tóxicos, actualmente no se tienen datos suficientes sobre esta fuente de variabilidad como para recomendar el uso de un clon determinado en el presente método de ensayo. Ha de señalarse que el ensayo no se realiza en condiciones axénicas, pero se toman medidas en distintas fases del procedimiento del ensayo para reducir al mínimo la contaminación por otros organismos.

Se cultivan plantas del género Lemna en fase de crecimiento exponencial como monocultivos expuestos a diferentes concentraciones de la sustancia problema durante un plazo de siete días. El objetivo del ensayo es cuantificar los efectos relacionados con la sustancia sobre el crecimiento vegetativo a lo largo de este plazo, a partir de la evaluación de unas variables de medición seleccionadas.

Se define como el valor de las variables de medición al final del tiempo de exposición menos el valor de las variables de medición al inicio de este tiempo. Debe contarse con un método analítico que tenga la sensibilidad adecuada para cuantificar la sustancia en el medio de ensayo.

Cuando sea particularmente importante el control del pH del medio de ensayo, por ejemplo cuando se estudien metales o sustancias hidrolíticamente inestables, se recomienda añadir un amortiguador al medio de cultivo véase el punto En el punto 49 se muestra cómo calcular el tiempo de duplicación. Para comprobar el procedimiento del ensayo pueden someterse a ensayo una o varias sustancias de referencia, como el 3,5-diclorofenol utilizado en el ensayo interlaboratorios internacional 7.

Se recomienda efectuar un ensayo con una sustancia de referencia al menos dos veces al año o, si la frecuencia de los ensayos es menor, en paralelo con la determinación de la toxicidad de una sustancia problema. Siempre que se respeten estas normas, no es fundamental el tipo de recipiente de ensayo. Debe ser posible regular la iluminación y la temperatura, y mantenerlas a nivel constante véanse los puntos Organismo de ensayo.

El organismo utilizado para este ensayo es Lemna gibba o Lemna minor. En el apéndice 2 se recogen Amor en linea en otras poblaciones de Uri descripciones de Amor en linea en otras poblaciones de Uri de lenteja de agua que se han utilizado en ensayos de toxicidad. El material vegetal puede obtenerse de una colección de cultivos, de otro laboratorio o del campo. Si se recogen del campo, las plantas deben mantenerse cultivadas en el mismo medio que se vaya a utilizar para el ensayo al menos en las ocho semanas anteriores a esta utilización.

Los lugares del campo utilizados para recoger los cultivos iniciales deben estar libres de fuentes de contaminación evidentes. Si se obtienen de otro laboratorio o de una colección de cultivos, los cultivos deben mantenerse similarmente durante un mínimo de tres semanas.

En el informe han de indicarse siempre el origen, la especie y el clon si se conoce del material vegetal utilizado para el ensayo. Deben utilizarse monocultivos que estén claramente Amor en linea en otras poblaciones de Uri de contaminación con otros organismos, como algas o protozoos. Las plantas sanas de L. La buena calidad de un cultivo viene indicada por una elevada frecuencia de colonias Amor en linea en otras poblaciones de Uri un mínimo de dos frondas.

Medio de ensayo. También es aceptable el medio de Steinberg 9siempre que se cumplan los criterios de validez. Para el cultivo de L. El medio de Steinberg, como se describe en el apéndice 4, es también adecuado para L. Soluciones de ensayo. Las soluciones de ensayo se preparan normalmente diluyendo una solución madre. En principio, las soluciones madre de la sustancia problema se preparan disolviendo la sustancia en medio de cultivo. La mayor concentración estudiada de la sustancia problema no debe superar como norma su hidrosolubilidad en las condiciones de ensayo.

No obstante, ha de señalarse que Lemna spp. No obstante, debe evitarse en la mayor medida posible el empleo de tales materiales. El uso de disolventes o dispersantes auxiliares no debe provocar fitotoxicidad. Grupos de ensayo y controles. En el ensayo definitivo de toxicidad deben emplearse al menos cinco concentraciones de ensayo dispuestas en progresión geométrica.

Si se usan menos de cinco concentraciones, hay que justificarlo. Al fijar el abanico de concentraciones de ensayo para el ensayo de determinación del intervalo o para el ensayo definitivo de toxicidaddebe tenerse en cuenta lo siguiente:.

Para determinar una EC xes necesario que las concentraciones de ensayo abarquen el valor de EC x a fin de asegurar un nivel adecuado de confianza. Por ejemplo, si se estima la EC 50la mayor concentración de ensayo debe ser superior al valor de EC Por otra parte, la mayor concentración de ensayo debe ser tan alta que el crecimiento correspondiente sea significativamente inferior al del control.

Se transfieren desde el cultivo de inóculo colonias formadas por entre 2 y 4 frondas visibles, repartiéndose aleatoriamente entre los recipientes de ensayo en condiciones asépticas.

Cada recipiente de ensayo debe contar con un total de 9 a 12 frondas. Es necesario un diseño aleatorio de la distribución de los recipientes de ensayo en la incubadora para minimizar la influencia de las diferencias espaciales de intensidad luminosa o temperatura. En tal caso, las colonias deben exponerse a soluciones de ensayo y control recién preparadas en al menos dos ocasiones durante el ensayo por ejemplo, en los días 3 y 5.

La posibilidad de exposición mediante aplicación foliar aerosol no se contempla en el presente método de ensayo; véase en cambio la referencia Condiciones de incubación. El método de detección y medición de la luz, en particular el tipo de sensor, influye en el valor medido. Sin embargo, una desviación superior a 1,5 unidades no invalida el ensayo si puede demostrarse que se cumplen los criterios de validez. Es necesario prestar atención particular a la deriva del pH en casos especiales, como cuando se estudian metales o sustancias inestables.

El ensayo termina a los siete días de la transferencia de las plantas a los recipientes de ensayo. Deben anotarse los cambios observados en el desarrollo de las plantas como, por ejemplo, en el tamaño, aspecto, indicación de necrosis, clorosis o protuberancias, rotura de colonias o pérdida de flotabilidad de las frondas, así como en la longitud y aspecto de las raíces.

Deben registrarse también las características significativas del medio de ensayo por ejemplo, presencia de material sin disolver o crecimiento de algas en el recipiente de ensayo. La superficie total de las frondas tiene la ventaja de que puede determinarse en cada recipiente de ensayo y de control al principio y al final del ensayo, así como durante el mismo. El peso seco o fresco debe determinarse al principio del ensayo a partir de una muestra de cultivo de inóculo representativa del utilizado para empezar el ensayo, y al final de este con el material vegetal de cada recipiente de ensayo y de control.

Si no se mide la superficie de las frondas, es mejor determinar el peso seco que el peso fresco. La superficie total de las frondas, el peso seco y el peso fresco pueden determinarse de la forma siguiente:. A continuación puede determinarse la superficie total de las frondas de un recipiente de ensayo calibrando con plantillas de superficie conocida.

Debe procurarse evitar las interferencias debidas al borde del recipiente de ensayo. También pueden ser adecuadas otras técnicas por ejemplo, el cociente entre el peso del papel correspondiente a la superficie del contorno de las Amor en linea en otras poblaciones de Uri y el de la superficie unitaria.

Peso seco: Se recogen todas las colonias de cada uno de los recipientes de ensayo y se lavan con agua destilada o desionizada. Deben incluirse los eventuales fragmentos de raíces. Peso fresco: Todas las colonias se transfieren a tubos de poliestireno u otro material inertepesados previamente, con pequeños agujeros de 1 mm en los fondos redondeados.

Después se vuelven a pesar los tubos, que contienen las colonias ahora secadas, y el peso fresco se calcula restando el peso del tubo vacío. Esta medición debe efectuarse al menos una vez durante el ensayo. Las concentraciones de la sustancia problema se determinan durante el ensayo a intervalos adecuados. El crecimiento en el grupo de control y en el de tratamiento pueden analizarse mediante un método estadístico para comparar las medias como, por ejemplo, una prueba t de Student.

Tiempo de duplicación. El objetivo del ensayo es determinar los efectos de la sustancia problema sobre el crecimiento vegetativo de Lemna.

A veces se denomina tasa de crecimiento relativa Esta variable de respuesta no debe utilizarse para comparar la sensibilidad de distintas especies, o incluso distintos clones, de lenteja de agua ante un agente tóxico. Aunque científicamente se prefiere el uso de la tasa media de crecimiento específico para estimar la toxicidad, en el presente método de ensayo se incluye también la estimación a partir del rendimiento para cumplir los requisitos reglamentarios vigentes en ciertas jurisdicciones.

Tasa media de crecimiento específico. Debe calcularse la tasa media de crecimiento específico correspondiente a toda la duración del ensayo el tiempo i en la fórmula anterior es Amor en linea en otras poblaciones de Uri principio del ensayo y el tiempo j es el final del mismo. Respecto a cada concentración de ensayo y control ha de calcularse un valor promedio de la tasa media de crecimiento específico con una estimación de la varianza.

Por otra parte, debe considerarse la tasa de crecimiento de cada sección para evaluar el efecto de la sustancia problema presente durante el período de exposición por ejemplo, examinando curvas logarítmicas de crecimiento. Después puede calcularse el porcentaje de inhibición en tasa de crecimiento I t correspondiente a cada concentración de ensayo grupo de tratamiento aplicando la fórmula siguiente:. En el caso del peso seco o del peso fresco, la biomasa inicial se determina a partir de una muestra de frondas tomada del mismo lote utilizado para inocular los recipientes de ensayo véase el punto Trazado de las curvas concentración-respuesta.

Se deben trazar las curvas concentración-respuesta que relacionan el porcentaje medio de inhibición de la variable de respuesta I r o I ycalculado como se indica en los puntos 56 o 57 con el logaritmo de la concentración de la sustancia problema. Estimación de EC x. Es posible utilizar una regresión lineal ponderada después de haber efectuado una transformación linealizante de los datos de respuesta como, por ejemplo, en probit o logit o unidades Weibull 13pero son preferibles los procedimientos de regresión no lineal porque con ellos se tratan mejor las inevitables irregularidades de los datos y las desviaciones respecto a distribuciones regulares.

Las estimaciones de la EC 50 y los límites de confianza pueden obtenerse también utilizando la interpolación lineal con remuestreo bootstrapping 17 si los métodos o modelos de regresión disponibles no son adecuados para los datos. Elaboración de informes. ASTM International E Reapprovedpp. OPPTS EPA C XP T Détermination de l'inhibition de la croissance de Lemna minor. Water quality — Determination of growth inhibition 7-d Lemna minorduckweed. SS 02 82 Environment Canada Sims, P. Whitehouse and R.

Lacey WRc plc — Environment Agency. Determinación del efecto tóxico de los constituyentes del agua y de las aguas residuales sobre la lenteja de agua Lemna minor. Ensayo de inhibición del crecimiento de la lenteja de agua. Walbridge, C. A flow-through testing procedure with duckweed Lemna minor L. Environmental Research Laboratory — Duluth, Minnesota September Lockhart W. Bioassays with a floating plant Lemna minor for effects of sprayed and dissolved glyphosate.

Huebert, D. Considerations in the assessment of toxicity using duckweeds. Environmental Toxicology and Chemistry12 Environmental Toxicology and Chemistry11, Norberg-King T. Biometrics, 20, Biometrics, Biomasa : peso seco de materia viva presente en una población. Clorosis : amarilleamiento del tejido de la fronda. Clon : organismos o células procedentes de un solo individuo por reproducción asexual. Los individuos del mismo clon son, por tanto, genéticamente idénticos.

A veces se le da el nombre de planta. Es la unidad mínima, es decir, individuo, capaz de reproducirse. Deformación : presencia de frondas con protuberancias o aspecto hinchado. Monocultivo : cultivo con una sola especie vegetal. Necrosis : tejido de la fronda muerto es decir, blanco o saturado de agua. Fenotipo : características observables de un organismo determinadas por la interacción de sus genes con su entorno.

Medio de ensayo : medio de cultivo sintético y completo en que crecen las plantas del ensayo cuando se exponen a la sustancia problema. Rendimiento : valor de una variable de medición para expresar la biomasa al final del período de exposición menos el valor de la variable de medición al inicio del período de exposición.

Descripción de Lemna spp. Se han descrito exhaustivamente sus diferencias de aspecto y taxonomía 1 2. Lemna gibba y Lemna minor son especies representativas de las zonas templadas y se utilizan frecuentemente en estudios de toxicidad. Ambas especies tienen un tallo discoidal fronda flotante o sumergido y una raíz muy fina que sale del centro de la superficie inferior de cada fronda. Las especies de Lemna no suelen echar flores, y las plantas se reproducen vegetativamente haciendo nuevas frondas 3.

El pequeño tamaño, la sencillez de la estructura, la reproducción asexual y el breve tiempo de generación de Lemna son características que convierten a las plantas de este género en idóneas para los ensayos de laboratorio 4 5. Lemna aequinoctialis : Eklund, B. The use of the red alga Ceramium strictum and the duckweed Lemna aequinoctialis in aquatic ecotoxicological bioassays. Licentiate in Philosophy Thesis Lemna major : Clark, N.

The rate of reproduction of Lemna major as a function of intensity and duration of light. Lemna paucicostata : Nasu, Y. Lemna duckweed as an indicator of water pollution. The sensitivity of Lemna paucicostata to heavy metals. Lemna perpusilla : Clark, J. Accumulation and depuration of metals by duckweed Lemna perpusilla.

Lemna trisulca : Huebert, D. Lemna valdiviana : Hutchinson, T. Heavy metal toxicity and synergism to floating aquatic weeds. Hillman, W. The Lemnaceae or duckweeds: A review of the descriptive and experimental literature. The Botanical Review, 27 Landolt, E. Biosystematic investigations in the family of duckweed Lemnaceae.

Geobotanischen Inst. Björndahl, G. Growth performance, nutrient uptake and human utilization of duckweeds Lemnaceae family. ISBN Wang, W. Toxicity tests of aquatic pollutants by using common duckweed. Environmental Pollution, Ser B, 11 Literature review on duckweed toxicity testing.

Environmental Research, 52 Mantenimiento de cultivos madre. El medio de cultivo de Lemna puede ser el mismo que se utilice en los ensayos, pero es posible utilizar otros medios ricos en nutrientes para los cultivos madre. Periódicamente se pasan varias plantas jóvenes, de color verde claro, a nuevos recipientes de cultivo con medio fresco, aplicando una técnica aséptica. En las condiciones de baja temperatura que se indican, pueden hacerse subcultivos a intervalos de hasta tres meses.

En relación con las algas y la mayoría de otros organismos contaminantes, esto puede efectuarse mediante esterilización superficial. Se toma una muestra del material vegetal contaminado y se cortan las raíces. Seguidamente se enjuaga el material vegetal con agua estéril y se transfiere, en una serie de lotes, a recipientes de cultivo con medio de cultivo fresco. Se recomiendan medios de cultivo distintos para L. Para L. A continuación se indican las composiciones de ambos medios.

Las soluciones madre VI y, en su caso, VII se esterilizan solo mediante filtración por membrana; no deben tratarse en autoclave. Las soluciones madre estériles deben conservarse en lugar fresco y oscuro. Las soluciones madre I — V pueden conservarse hasta seis meses, mientras que las soluciones madre VI y, en su caso, VII deben desecharse al cabo de un solo mes. Medio de cultivo 20X AAP. En estas condiciones pueden mantenerse durante al menos 6 u 8 semanas. A unos ml de agua desionizada se añaden 20 ml de cada solución madre de nutrientes para obtener el medio de cultivo.

Amor en linea en otras poblaciones de Uri

El medio de cultivo destinado a los ensayos debe prepararse uno o dos días antes de usarlo, a fin de que el pH pueda estabilizarse. Para preparar el medio deben utilizarse sustancias de grado analítico o reactivo y agua desionizada.

Cuadro 2. Soluciones madre macroelementos. Cuadro 3. Soluciones madre microelementos. Pueden reunirse las soluciones madre 2 y 3 por un lado y, por otro, de la 4 a la 7 teniendo en cuenta las concentraciones establecidas. Preparación del medio de Steinberg modificado a la concentración final.

Preparación del medio de Steinberg modificado a concentración 10 veces mayor para su conservación intermedia. Se añaden 20 ml de las soluciones madre Amor en linea en otras poblaciones de Uri, 2 y 3 véase el cuadro 2 a unos 30 ml de agua para evitar la precipitación.

Se añade 1,0 ml de las soluciones madre 4, 5, 6, 7 y 8 véase el cuadro 3. Los métodos de ensayo se revisan periódicamente en Amor en linea en otras poblaciones de Uri de los avances científicos y de su aplicabilidad con fines reglamentarios.

Sin embargo, no cubre los efectos crónicos ni los efectos sobre la función reproductora es decir, semillas, formación de las flores, maduración de los frutos. Este método de ensayo no se ocupa de las plantas expuestas a vapores de las sustancias. El método de ensayo es aplicable a los ensayos de sustancias y mezclas en general, biocidas y productos fitosanitarios también conocidos como plaguicidas o pesticidas.

Se ha desarrollado sobre la base de métodos existentes 2 3 4 5 6 7. También se han tenido en cuenta otras referencias pertinentes para los ensayos con plantas 8 9 En el apéndice 1 se dan las definiciones utilizadas. Estas mediciones y observaciones se comparan con las de las plantas de control sin tratar.

En función de la vía de exposición prevista, la sustancia problema se incorpora al suelo o bien a Amor en linea en otras poblaciones de Uri matriz de suelo artificial o se aplica a la superficie del suelo, de forma que se represente adecuadamente la posible vía de exposición a la sustancia. La incorporación al suelo se realiza por tratamiento de suelo bruto.

Después de la aplicación, el suelo se transfiere a macetas y, a continuación, se siembran en el suelo semillas de la especie vegetal seleccionada. Las aplicaciones en superficie se hacen con suelo en macetas en el que ya se han sembrado las semillas. Puede someterse a ensayo una sustancia de referencia a intervalos regulares, con el fin de comprobar que el comportamiento del ensayo y la respuesta de las plantas concretas del ensayo, así como las condiciones de ensayo no han cambiado de forma significativa a lo largo del tiempo.

Los datos anteriores de biomasa o de crecimiento de los controles pueden utilizarse también para evaluar el comportamiento del sistema de ensayo en laboratorios concretos, y pueden constituir una medida de control de la calidad intralaboratorio. Suelo natural — sustrato artificial.

No deben utilizarse suelos arcillosos si se sabe que la sustancia problema tiene elevada afinidad por la arcilla. El suelo debe clasificarse con arreglo a un sistema de clasificación normal El suelo puede pasteurizarse o someterse a tratamiento térmico para reducir el efecto de los patógenos del suelo.

El suelo natural puede complicar la interpretación de los resultados y aumentar la variabilidad debido a su diversidad de propiedades físicas y químicas y de poblaciones microbianas. Estas variables, a su vez, alteran la capacidad de retención de humedad, la capacidad de formar enlaces químicos, la aireación y el contenido de nutrientes y de oligoelementos. Los sustratos artificiales no se emplean normalmente para los ensayos de productos fitosanitarios, pero pueden ser de utilidad para los ensayos de sustancias o mezclas en general o cuando se desee reducir al mínimo la variabilidad de los suelos naturales y aumentar la comparabilidad de los resultados de los ensayos.

Los sustratos utilizados deben estar compuestos de materiales inertes que minimicen la interacción con la sustancia problema, con el vehículo disolvente, o con ambos. Entre los sustratos inadecuados figuran la vermiculita, la perlita y otros materiales muy absorbentes.

Criterios de selección de las especies de ensayo. Las especies seleccionadas deben ser suficientemente amplias, p. Para la selección deben tenerse en cuenta las siguientes características de las posibles especies de ensayo:. Aplicación de la sustancia problema. También pueden someterse a ensayo las mezclas productos formulados o formulaciones que contienen principios activos y varios coadyuvantes. Incorporación al suelo o al sustrato artificial. Las sustancias que son hidrosolubles o se suspenden en agua pueden añadirse al agua y, a continuación, la solución se mezcla con el suelo, mediante un dispositivo de mezcla.

Este tipo de ensayo puede ser adecuado si la exposición a la sustancia se hace a través del suelo o del agua intersticial del suelo y cuando hay riesgo de absorción radicular. La adición de la sustancia problema no debe superar la capacidad de retención de humedad del suelo.

El volumen de agua añadida debe ser el mismo para cada concentración de ensayo, pero debe limitarse para evitar que el suelo se aglutine en agregados.

El disolvente puede eliminarse de la arena a continuación con una corriente de aire al tiempo que se remueve continuamente la arena. La arena tratada se mezcla con el suelo experimental. Se establece un segundo control que solo recibe arena y disolvente. Se añaden a todos los niveles de tratamiento y al segundo control las mismas cantidades de arena, con disolvente mezclado y eliminado.

En el caso de sustancias problema sólidas insolubles, se mezclan la sustancia y el suelo seco en un mezclador adecuado. A continuación se añade el suelo a las macetas y se siembran las semillas de forma inmediata. Cuando se utiliza un sustrato artificial en lugar de suelo, las sustancias hidrosolubles pueden disolverse en la solución de nutrientes justo antes del inicio del ensayo.

Las sustancias que no son hidrosolubles, pero que pueden suspenderse Amor en linea en otras poblaciones de Uri agua utilizando un vehículo disolvente, deben añadirse con el vehículo a la solución de nutrientes. La solución se mezcla con arena o perlas de vidrio, se coloca en un aparato rotativo de vacío y se somete a evaporación, para que quede en la arena o en las perlas una capa uniforme de la sustancia. Aplicación en superficie. En el caso de los productos fitosanitarios, para la aplicación de la sustancia problema se suele rociar la superficie del suelo con la solución de ensayo.

Todos los equipos utilizados para realizar los ensayos, incluidos los equipos utilizados para preparar y administrar la sustancia problema, deben ser tales en cuanto a su diseño y capacidad que los ensayos correspondientes puedan realizarse de una manera exacta y que se obtenga una cobertura reproducible. La cobertura debe ser uniforme en todas las superficies del suelo. Se rocía la sustancia problema en la superficie del suelo simulando las aplicaciones de un tanque de pulverización normal.

El tipo de boquilla debe seleccionarse para proporcionar una cobertura uniforme de Amor en linea en otras poblaciones de Uri superficie del suelo.

Amor en linea en otras poblaciones de Uri

The love triangle and the rupture provided by the fourth element are carefullly studied, in the perspective of a definition of the story as a single episode narrative or as a single motivation narrative.

This organic definition is essential to the narrative discourse under analysis, in which are perceived structural oppositions between light and dark, harmony and disharmony, nature and marginality, interior and exterior. Finally, a classification is essayed from the viewpoint of an Amor en linea en otras poblaciones de Uri organization through a typology, all of which carries the exegesis to a diachronic and historical proposal, in this way bringing into study the notions of exegesis, promotion, tendency and trend, characteristics of the construction of the literary history in the superrealist Amor en linea en otras poblaciones de Uri.

Key Words : Generation; promotion, tendency and trend current ; characteristics of the surrealist period. El relato asume una importancia fundamental en la escritura de José María Arguedas, la cual ha sido estudiada por Angel Rama, en especial relación con la novela Los ríos profundos. Al igual que Rama, interesa aquí la "respuesta al conflicto vanguardismo-regionalismo", en un sentido literario.

El relato "Warma kuyay", al seleccionar una anécdota tal vez mínima, sin embargo llega a plantear disyuntivas fundamentales para la existencia latinoamericana. El terreno frontal del relato es la hibridez descrita en diferentes niveles, la consideración de la respuesta cultural en su connotación política, la denuncia de una situación económica las relaciones de producción en la hacienda y también una situación de género el abuso de Justina. A diferencia del indigenismo tradicional americanista, el acto de injusticia humano y genérico acontecido no se centra en la ejecución del acto de violación, sino en las respuestas o reacciones de los personajes principales frente a la ofensa o contradicción.

La muerte de Arguedas, esto es, su suicidio, encerró violentamente su obra y originó una serie de estudios importantes de su obra. El mismo añoWilliam Rowe concluye su "Contribución a una bibliografía de José María Arguedas" 5que incluye toda su obra en los géneros de novela, cuento, poesía, ensayo y traducciones del quechua al español.

Gladis C. Marín, en su obra La experiencia americana de José María Arguedasestudia "Warma kuyay", exponiendo bien la oposición entre vida y muerte en el relato 6.

Lo materno, lo femenino, lo natural, lo musical son estudiados como componentes esenciales de la quebrada 7. También aportó Antonio Urrello con su libro José María Arguedas: El nuevo rostro del indiouna estructura mítico-poética 8. Finalmente, se intenta una clasificación, desde el punto de vista de su organización interna mediante una tipología, todo lo cual lleva la exégesis a una propuesta histórica y diacrónica, abordando así las nociones de generación, promoción, tendencia y corriente, características de la construcción de la historia literaria Después de una conversación nocturna, el joven indio ejercita su venganza sobre los animales de la hacienda, en presencia del niño, hasta que éste se arrepiente de sus acciones y obtiene que el indio se aleje de la comunidad.

Finalmente, el muchacho blanco es llevado a la costa, donde se siente externo, recordando todo lo anterior. Los personajes y los acontecimientos así lo atestiguan. Kutu y el niño Ernesto se presentan como los dos extremos que aspiran a Justina. Ella es el centro de sus miradas, intenciones y acciones. Han puesto sus esperanzas y realidades en su figura. Pero hay un primer aspecto que ya resalta: un indio, Kutu, y un blanco, Ernesto, tienen un Amor en linea en otras poblaciones de Uri objetivo, un mismo centro de atención.

En Justina pues, se han yuxtapuesto los ideales de dos culturas, representadas por los dos pretendientes. En las primeras líneas del cuento, el niño Ernesto mismo muestra conocer la relación que une a Justina con el Kutu: "al Kutu le quieres Solo se dice que es sobrino del otro dueño de la hacienda y, por tanto, conviene fundamentar aquí su condición. Se observa, por ejemplo, en el tratamiento que las indias tienen para con él al decirle "déjame niño Ernesto Aquí, la oposición entre las posibilidades de ambos es evidente, mostrando esta idea, en definitiva: "yo no puedo pues soy indio, tu puedes pues eres blanco".

También es manifiesto el tipo de nexo que intenta mantener el niño Ernesto con Justina, el muchacho blanco expresa que "a los catorce años yo la quería", que sus encantos lo desesperan: "su boca llamaba al amor", y su ligazón es tanta -en sus aspiraciones al menos- que en un vuelco del amor a la perversidad juvenil, prefiere matarla antes que otro se quede con ella, desconfiando al mismo tiempo de las Amor en linea en otras poblaciones de Uri morales de la amada: "ella misma, seguro, ella misma Mejor la mataremos los dos a ella.

El protagonista de la cultura indígena quechua, ama lo mismo que el niño blanco. Han enfocado el mismo ser. Han estructurado sus vidas en torno a la misma realidad. La oposición entre ambos se manifiesta en la primera escena de burlas y separación para con el muchacho: "Celedonia, Pedrucha, Manuela, Natacha soltaron la risa Yo me quede afuera del círculo" Es la manifestación de esta fuerte aversión que el niño tiene en su lenguaje mismo, y la separación del muchacho blanco del grupo indígena es el acontecimiento concreto que prueba esa rivalidad, afianzada por el contexto social de los restantes indios En Justina se ha realizado así la superposición de ideales de dos individuos, se ha transformado en el centro de atención del indio y del blanco, de dos sectores geoculturales.

Ambos tienen distintas reacciones frente a Justina y ambos terminan finalmente separados de ella en actitudes opuestas. Pese a todo, ella ha conciliado en sí ambas vertientes, en ella los contrarios se han anulado, surgiendo en el relato como una figura omnipresente en Kutu y Ernesto, pero ausente de la acción, salvo en la primera escena.

Es evidente la relación "real" que ambos tienen con Justina. También es evidente lo que desearían tener: Kutu quiere por esposa a Justina, naturalmente, y el niño quiere a Justina como Ahora le voy a hablar a Justina para que te quiera. Pese a que no se entrega expresamente en el cuento, es casi efectiva la mayor edad que Justina Amor en linea en otras poblaciones de Uri. De allí la persistencia que ambos mantienen hacia ella en algunos momentos del relato, planteada, eso sí, en diferentes términos.

Justina aparece así, nuevamente, como una yuxtaposición de ideales contrarios. En este sentido, Justina es a la vez concentración y anulación de dos tiempos, un lugar infinitamente deseado, el centro de atracción de todas las edades.

A la par, también se han concentrado y anulado los espacios vitales de Kutu y Ernesto, las culturas que representan. Justamente, Justina es la contraposición y convergencia de las contradicciones, el polo aspirado por todos, la instancia narrativa superreal que Amor en linea en otras poblaciones de Uri las otras existencias.

El momento de la discusión entre Kutu y el niño Ernesto es lo central en el cuento. Aparece como eje de la narración. Frente a este odio del niño blanco, de la cultura blanca, al no poder conseguir lo que desea, presentando soluciones profundamente negativas, se ubica, contrapuesta, la actitud del Kutu.

Es indispensable hacer notar, sin embargo, que la reacción de Kutu posee una cierta adecuación y coherencia. Kutu ya no sirve a la comunidad. La interinfluencia se muestra como efectiva, entonces. El muchacho blanco lo rechaza, lo expulsa: "ya en Viseca no sirves, indio".

El muchacho y el adulto, el blanco y el indio desean a la misma mujer india. Con estas características la ve Kutu -mujer e india- y por eso la pretende y es correspondido. El mismo niño también lo reconoce. Algo diferente le pasa al niño Ernesto. La lejanía del muchacho con respecto a Justina es efectiva. Es una lejanía no solo espacial, no solo sentimental, sino que también temporal.

El es un niño y ella casi una mujer. Esta misma distancia hace que Justina -la mujer india- aparezca ante los ojos de Ernesto no solamente como una visión lejana, sino que también como una figura idealizada, sublimando incluso sus características mismas de pertenencia a la cultura quechua. La "palomita" y la "gaviota" ya prefiguran -junto a la explícita comparación: "te pareces a las torcazas de Sausiyok", la imagen de Justina en el espíritu del niño.

Al final del cuento, la visión del muchacho recuerda a Justina y juntamente también "el canto de las torcazas y las tuyas". Sus pechitos parecían limones grandes y me desesperaban". Aparte de aparecer como la bella figura de la amada, surge como absolutamente separada del resto, su cara no es morena sino que rosada y da tal intranquilidad, que no deja dormir.

Es adornada, finalmente, en su intimidad, con rasgos naturales. Los ojos son sumamente importantes para Ernesto, siempre los recuerda, ya que los ojos son muy importantes en las concepciones del amor "l'amour courtois", por ejemplo.

Justina es profundamente imperativa, apelativa sobre la existencia de Ernesto: ese "llamaba" lo prueba. No escatima del abuso, dentro de sus métodos para obtenerla. Un momento de soledad da pie para su deshonesta acción. Frente a él, el Kutu y Ernesto se constituyen en una unidad para oponerse a las tropelías del patrón, representante de la clase alta, del sector patronal-terrateniente.

Kutu y Ernesto constituyen, en definitiva, un bloque defensor de Justina por amor. Son los subalternos, los hegemonizados. El relato "Warma kuyay" presenta la alternación de un discurso narrativo en primera persona, correspondiente al niño Ernesto, con un discurso narrativo-descriptivo en tercera persona. El narrador en tercera persona tiene en este cuento escasa participación.

Aparece como un desdoblamiento de la primera persona planteada en términos ambiguos. Este narrador en tercera persona es quien comienza el discurso: "noche de luna en la quebrada de Viseca", descripción ambiental totalizadora que no ha dicho Ernesto. Este narrador en tercera persona describe el mundo en términos bastante objetivos, las veces que participa del discurso. Su esfera de realidad es el recuerdo, desde la cual se establecen las dos primeras unidades del relato.

La disposición de la narración tiene justificación, puesto que se explica -por oposición- en las dos primeras unidades, lo que angustia en la tercera unidad, escrita en un desgarrado presente. Es decir, se es ahora un extraño, porque se vivió antes en otro lugar. Este narrador personaje contribuyó a la creación de su mundo mediante métodos indirectos y directos, en ajustada proporción. Este mismo equilibrio se realiza en cuanto descripción y narración realizadas, combinando así el dinamismo y la estaticidad.

La forma de este discurso es, evidentemente, la que se ha llamado "ab ovo", es decir, el relato y el transcurso de las acciones ha sido desarrollado desde sus primeros puntos temporales. No tiene poder alguno. La no coincidencia étnico-cultural se hace mayor con la no coincidencia cronológica.

Un abismo los separa. El lenguaje en estilo indirecto de este narrador entrega un suceso en la primera oración, pero al ser compuesta, se encuentran dos unidades en ella. En la primera unidad, se informa de la retirada de los indios, y en la segunda, el hecho de que el Kutu ha quedado allí. Así, el narrador ha contado dos veces el mismo suceso: la retirada de los indios.

Y lo ha hecho en la primera unidad de las dos oraciones, donde ha ubicado un tercer término que se repite. La presencia de Ernesto ni siquiera se narra. Lo dice ese lenguaje en estilo directo: "a ese le quiere". Pero hay una dificultad. No se sabe quien pronuncia estas palabras, ni quien quiere al Kutu, con seguridad. Pensamos que la indeterminación parte de no poseer "verba dicendi", un verbo que describa la situación enunciativa sin ambigüedad, en una expresión en lenguaje directo.

Y queda abierta la posibilidad de que sea Ernesto o también Amor en linea en otras poblaciones de Uri opinión manifestada por varios indígenas a la vez, algo así como una opinión socializada, evidenciando la situación. En cuanto al segundo problema, de quién quiere al Kutu, hay dos posibilidades. La oposición entre ambos -teñida por el mal agüero- es evidente.

Es el mismo resultado en ambas posibilidades. Y es Kutu el que cumple con estos requisitos, es el mejor "amansador de potrancas", "el mejor novillero", como él Amor en linea en otras poblaciones de Uri lo dice, en las primeras líneas: "soy buen laceador de vaquillas y hago temblar a los novillos de cada zurriago". Es de mi enemigo. Hablaba en voz alta para engañarme, para tapar el dolor". El Kutu dice: "yo, pues, soy endio, no puedo contra el patrón".

En una Amor en linea en otras poblaciones de Uri negativa, el Kutu expresa claramente quién es su enemigo. Y se da cuenta de sus imposibilidades para arremeter en contra de él. La oposición queda nuevamente establecida entre los verdaderos enemigos. Si el indio se levanta y pelea, la jauría de los blancos cae sobre él. En este Amor en linea en otras poblaciones de Uri, la flagelación de las reses es la muestra de la impotencia del sujeto para buscar una solución mejor. Las leyes no cambian a los hombres.

Ni remedian los males pasados. No crean amor ni hacen desaparecer el odio. Si el indio levanta la voz y reclama, lo encarcelan inmediatamente. Su autoridad dictatorial se demuestra en el momento en que echa a los indios a dormir.

Su abuso sobre Justina no es castigado por nadie. La imagen que da el niño Ernesto de él es efectiva: "el puma ladrón". Es un abuso para con los hombres y para con el mundo la presencia y actuar del terrateniente.

El espacio guarda las huellas de su explotación. Se presenta como pobre y gastado. El lavadero de metal, el tubo de aire proclamando la tristeza, las ruedas enmohecidas, son testimonios elocuentes. El escarbe de papas, los caseríos misérrimos, son otras pruebas de esta baja condición del mundo. Su relación con Justina se da en el plano de las posibilidades, no en el de las realidades. Se rompe por las repercusiones, por los ecos de esta ruptura fundamental. En varios momentos del cuento, el contraste entre luz y oscuridad es fuerte y evidente El primero de ellos se encuentra al comienzo del cuento.

Es aquella "noche de luna en la quebrada de Viseca", voz del narrador en tercera persona, con la cual comienza la primera escena del cuento. Separado del círculo de los indios que hablan y cantan, Ernesto es guiado "por el blanqueo de la pared" del molino viejo al cual se encarama y eso era "como las nubes que correteaban en las laderas del Chawala". Las nubes y el blanqueo asumen el papel de guía, de la esperanza que se busca y no se encuentra en medio de la oscuridad exterior: las "sombras" de los eucaliptus, "el cerro, medio negro Se ha conformado una oscuridad exterior donde deslumbran elementos brillantes blanqueo, en lo real, y nubes en lo evocado pero toda esta situación de luz y sombra tiene su correlato en esa oscuridad interior del niño marginado, en esa pena psíquica del desplazado social y sentimentalmente, negrura en la cual se engasta un puntito brillante: su amor por Justina, su esperanza de tenerla, su visión de ella.

La oscuridad, finalmente, surge entonces como la no correspondencia de Amor en linea en otras poblaciones de Uri, también, aparte de los valores ya señalados En el centro de esta primera unidad estructural del relato se ubica una segunda mención: "empecé a llorar como si hubiera estado solo, abandonado en esa gran quebrada oscura".

La tranquilidad de la luz ha desaparecido, dando paso a la "negra pena" de la oscuridad. Luego, la noche se hace omnipresente después de haber sido la mediadora en la confidencia nocturna entre Kutu y Ernesto, en la casa. El narrador en tercera persona continua inmediatamente: "los cerros ennegrecieron". Es el final de la primera unidad estructural del cuento, la que termina con el desaparecimiento de la luz.

Había comenzado con la mención a la "noche de luna". Los valores luz y sombra son correlatos efectivos de la interioridad de esos dos seres que Amor en linea en otras poblaciones de Uri a Justina. La oscuridad final, en definitiva, es la mentalidad apenada de ambos, la venganza planeada de Kutu, la soledad para Ernesto.

La segunda unidad estructural del cuento Amor en linea en otras poblaciones de Uri una conformación inversa a la primera.

Amor en linea en otras poblaciones de Uri

No va, como ella, de la luz a la oscuridad, y de allí, a la luz. Comienza con la noche que permite la maldad y la venganza de Kutu. Es la noche de la maldad. Estas son sus palabras: "me vencían la desesperación y el arrepentimiento. Salté de Amor en linea en otras poblaciones de Uri cama descalzo, corrí hasta la puerta, despacito abrí el cerrojo y pasé al corredor.

La luna ya había salido: su luz blanca bañaba la quebrada". Esa luz de la luna es la luz del arrepentimiento, que preludia un día tranquilo, la luna guía al muchacho que corre arrepentido por esa quebrada. Por eso, él mismo dice: "y una ternura sin igual, pura, dulce como la luz en esa quebrada madre, alumbró mi vida". Se añade que "a la mañana siguiente encontré al indio en el alfalfar de capitana. El cielo estaba limpio y alegre, los campos verdes, llenos de frescura".

Estas palabras de Ernesto muestran cómo para él ha clareado un nuevo día. El amanecer es el equivalente de esa interioridad escapada de la oscuridad y de la noche. Un dato final al respecto. Esta unidad contiene, en esencia, el cambio que le ocurre a Ernesto. Va de la oscuridad interior a la luminosidad interior, de la oscuridad externa a la luminosidad externa, también. La frase en cuestión es: "viví alegre en esa quebrada verde y llena del calor amoroso del sol.

Hasta que un día me arrancaron de mi querencia". Se lo califica de "amoroso". Es la luminosidad ausente que se añora. El momento final del relato extrema la situación de oposición entre Kutu y Ernesto.

El muchacho ha sido llevado hacia la costa. La desorientación lo invade. Socialmente es un extraño en el mundo. Así también existencialmente, la soledad que tenía se ha extremado y él ha llegado a ser consciente Amor en linea en otras poblaciones de Uri esta situación.

La entrega por medio de una frase comparativa: estaba "como un animal de los llanos fríos llevado a la orilla del mar, sobre los arenales candentes y extraños" La extranjeridad y la marginación se dan por intermedio de un triple juego de ideas: ha pasado de los llanos a la costa, de la frialdad a lo candente, de la dureza del terreno montañoso a la inseguridad del pisar en la arena.

Se encuentra en una relación de inarmonía con el mundo, descontento con él, opuesto a él. En cambio, la posición social que mantiene el Kutu es distinta y opuesta. Tanto recuerda, que el relato mismo es la prueba de su recuerdo, la expresión escrita de él. No es tan exacto. La ciudad, propiamente tal, no se encuentra aquí buscada en la dimensión que el naturalismo le concedió.

Los quechuas no llegan corrientemente a la orilla del mar. Y lo que encontramos es una cultura cerrada para la otra, incomunicada. La interioridad psíquica de Ernesto, tiene pues, un movimiento muy definido. Va de lo interno el recuerdo a lo externo la relación del cuento mismo.

Ya tendremos la mitad restante. En franca oposición a todo esto, tenemos al Kutu "en los pueblos del interior", con los "comuneros". El proceso de interiorización -disminución mental de un acontecimiento- de Kutu es opuesto al proceso de exteriorización del niño Ernesto. En el indio, el movimiento va de la realidad de los hechos sucedidos lo externo a una acción de guardar y hacer desaparecer dentro de sí todo lo interno.

La situación final, en la cual Amor en linea en otras poblaciones de Uri encuentra el niño Ernesto, deja el sabor gris del motivo del extraño en el mundo. Surge aquí, pero con un sentido existencial.

Ernesto tiene una experiencia de la marginalidad del existir, de no estar integrado al mundo, de sentirse y ser rechazado por los otros. La tercera y breve unidad estructural del relato solo muestra la conciencia que adquiere el muchacho acerca de su existir.


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Los dos son autores a los que he conocido en algún momento, con los que Esquivias recibió con su anterior libro de cuentos La marca de. llegar a un compromiso con su pareja para tener cierta cantidad de sexo de todos . en cierta ocasión que “la mujer más fascinante que he conocido cometió un En “Viene la noche” de Óscar Esquivias hay una pareja asexual, que pese a. «Habiendo nacido Jesús en Belén de Judea en tiempos del rey Herodes, unos es probablemente el sacerdote más conocido por la opinión pública gala. por sexo. Gonzalo Baro´ n-Esquiviasa,*, Silvia Go´ meza, Helena Brufaub, Lorena .. conocido de los otros presenta descompensaciones de la arritmia, se.

Sorprende mucho, porque sólo por trabajar ya tienes contacto directo con la gente, pero esa conexión la vives desconectado. Ves las cosas, pero como desde tu burbuja. Suena como a Matrix, pero es cierto: En el Opus Dei hay montones de normas: Yo lo sé muy bien porque en la oficina de numerarios donde trabajaba preparaba todos los años los criterios que les íbamos a dar.

Había que repasarlos, aunque la mayoría eran los mismos todos los años. Había que ser exacto con las normas.

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Sobre las mujeres, sobre las relaciones sociales, sobre los libros, normas sobre todo. Para ti lo que haces es normal. O cómo planteas las relaciones.

Pero en aquellas tabernas no sólo había vino y música, sino también sexo, . manuscritos moriscos, también pudo haber conocido al misionero español. 'En el Opus Dei se obliga a los directores a ser directores de conciencia o a alguien menos clásico: Krishnamurti: "Liberarse de lo conocido".

La gente te pregunta quién te crees que eres. Sinceramente, nunca he vuelto a pensar si hice bien o si debería volver, aunque me haya costado manejarme. Yo entré, como la mayoría de numerarios, con 16 años. En algunas cosas eres, todavía, un adolescente.

Incluido el tema sexual, claro. En todo ese aprendizaje de vivir, todavía tiene un conflicto con la Obra: Normalmente, cuando uno cambia de empresa, aunque afronte un cambio tiene su hipoteca, su casa, sus cosas. Yo salí sin nada en absoluto y me lo tuve que trabajar sin ahorros. Pero lo que no me puedo inventar es que estuve treinta años sin cotizar, que ahora no conocido por el sexo Esquivias quien los cubra. Yo he empezado este movimiento un poco por eso, porque he llegado a los 60 años y de pronto me encuentro que tengo cotizados los años después de salir de la Obra, pero conocido por el sexo Esquivias los treinta años que trabajé para ellos.

Yo salí con 45 años, y no tenía nada: Trabajaba como un loco, en horarios de catorce o dieciséis horas. La Obra es especialmente dura en hacerte sentir desprotegido. Todas mis relaciones las he tenido dentro de la Obra, porque he estado treinta años. Salvo mi familia, no conocía a nadie fuera de allí.

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Miguel Lugones Botell, Dra. Sigmund Freud, quien estudió el devenir sexual del ser humano, sus características principales y sus conflictos, hasta concluir que la sexualidad desempeña un rol determinante en la vida y en la psiquis del ser humano, estaría sorprendido de advertir que, en los albores del siglo XXI, el sexo no provoca ni trasnocha al uno por ciento de la humanidad.

Algunos solo experimentan una de las dos, otros las dos y otros ninguna. Algunos asexuales pueden experimentar sensaciones sexuales, pero no tener deseo de actuar sobre ellas, mientras que otros intentan conseguir la descarga sexual mediante el acto sexual o la masturbación. Esto hace que la convivencia con la sociedad en que nos encontramos, donde el sexo parece tener un lugar tan importante, pueda llegar a ser complicada y difícil para los asexuales.

“El Opus Dei es una prisión”

En este sistema, los asexuales se dividen en varios tipos, de A a D: La asexualidad se presenta en una de cada personas. Son socialmente activos y sexualmente pasivos. Disfrutan de la soledad, mas cultivan la amistad. Prescindir del coito no significa renunciar a la pareja, también se enamoran. No existe un acuerdo sobre si llegar a reconocer a las personas asexuales como una orientación sexual que sea considerada como legítima.

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Entre los asexuales se distinguen dos grupos de personas: Mientras que los primeros pueden ser felices, los segundos permanecen frustrados. En Estados Unidos, un joven de 24 años ha fundado un movimiento: Se ha referido que parece ser que esta ausencia del deseo sexual surge en la infancia, entre los 6 y 10 años, lo que se conoce como el período de latencia.

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A esa edad, el niño deja de interesarse por la sexualidad después de preguntar sobre el tema con insistencia. Este desinterés por el sexo finaliza con el inicio de la adolescencia; pero para algunos, dura toda la vida. Suelen ser, por norma general, individuos que rechazan crecer o que, sometidos a una presión moral muy importante, tienen miedo a sus fantasmas y prefieren reprimirse.

Los asexuales no hacen el amor, pero se pueden masturbar sobre todo los hombresno como respuesta a un estímulo, sino por necesidad fisiológica. En general, la asexualidad dura toda la vida en aquellas personas que realmente no sienten deseo sexual alguno.

Para las que simplemente reprimen inconscientemente sus deseos, podría serles de utilidad someterse a una terapia que les permita despertar de nuevo la libido que tan dormida tienen. No se sabe, como tampoco se conocido por el sexo Esquivias qué pasa en el cerebro ni en el sistema nervioso central ante la interacción con otras personas. Algunos especialistas opinan que, como en cualquier otra orientación, se nace siendo asexual, y que hay evidencias de factores prenatales fundamentales en su desarrollo.

Lo que las investigaciones han podido identificar hasta ahora es que muchos asexuales tienen reacciones biológicas como erección y lubricación vaginal hasta llegar, incluso, al orgasmo. Salvo algunos casos, no hay incapacidad física, sólo un genuino desinterés. En estricto orden biológico, así es.

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El sexo es perfecto, fue creado por Dios y es la celebración de conocido por el sexo Esquivias vida y el amor. Por eso mira con recelo la asexualidad, señalando que debería abordarse desde la medicina, pues cree que allí hay un vacío.

La psiquiatría tiene clasificados dos tipos de conducta: Los asexuales critican ese diagnóstico y advierten que el estrés no es por el sexo, sino por la discriminación social y la dificultad de conseguir pareja, porque aunque prescindan de conocido por el sexo Esquivias cama, muchos sí quieren y necesitan afecto. La gente asexual puede tener relaciones carnales por conveniencia o curiosidad, pero no las necesita.

Asexualidad y religión En otros credos, los niños son considerados un regalo de Dios que no debe ser rechazado, un medio de propagar la religión o ambas cosas; sin embargo hay que notar que algunos asexuales tienen hijos y que algunas religiones han elogiado tanto la asexualidad como los niños. La asexualidad no debe confundirse con el celibato. Un cuento de ciencia ficción del escritor Samuel R.

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